|
|
Electrochemical biosensors with spatially separated enzymatic and detection parts for selective analysis in flow-through arrangement
Tvorynska, Sofiia ; Barek, Jiří (vedoucí práce) ; Labuda, Ján (oponent) ; Korecká, Lucie (oponent)
Předpokládaná disertační práce pojednává o čtyřech nově vyvinutých, opakovaně použitelných, stabilních a zároveň jednoduchých a cenově výhodných elektrochemických (bi)enzymatických biosenzorech pro selektivní a spolehlivé stanovení cholinu, acetylcholinu, močové kyseliny a L-mléčné kyseliny. Všechny biosenzory jsou založeny na koncepci prostorového oddělení biorozpoznávací části od detekční a amperometrického monitorování enzymaticky spotřebovaného kyslíku prostřednictvím jeho čtyřelektronové redukce při vysoce záporném detekčním potenciálu. Konstrukce biosenzorů zahrnuje snadno vyměnitelný enzymatický/é mini-reaktor(y) připojený/é před průtokovou celou, která obsahuje příslušný převodník na bázi pevného stříbrného amalgámu. Enzymatické mini-reaktory založené na cholin oxidase, urikase nebo laktát oxidase byly použity pro biosenzory na cholin, močovou kyselinu nebo L-mléčnou kyselinu. Bienzymatický biosenzor na acetylcholin zahrnuje sériově propojené mini-reaktory na bázi acetylcholinesterasy a cholin oxidasy. První část této práce se zaměřuje na konstrukci dvou různých elektrod na bázi stříbrného amalgámu. Konkrétně tato část pojednává o výrobě stříbrné pevné amalgámové elektrody pokryté rtuťovým filmem pro wall-jet průtokovou celu a navíc, zdůrazňuje rozdíly mezi jejím využitím jako...
|
|
|
Adaptace centrálního nervového systému na chybění acetylcholinesterázy
Farár, Vladimír ; Mysliveček, Jaromír (vedoucí práce) ; Jakubík, Jan (oponent) ; Cordero-Erausquin, Matilde (oponent)
Acetylcholinesteráza (AChE) účinně hydrolyzuje acetylcholin (Ach). Inhibice AChE je letální a myši s chyběním AChE ve všech tkáních (AChE KO) jsou těžce poškozeny. AChE je v CNS kotvena na prolin bohatou kotvou - proline-rich membrane anchor (PRiMA), zatímco ve svalech je kotvena kolagenem Q (ColQ). V této disertaci popisujeme že u PRiMA KO myší, u nichž je AChE v CNS eliminována, nedochází k významným změnám v chování i přes nadbytek ACh a adaptaci cholinergních receptorů podobnou té, která byla pozorována u AChE KO myší. Kromě toho u myší, u nichž AChE nemůže interagovat s PRiMA i ColQ, je fenotyp podobný jako u AChE KO myší, ale biochemické změny v CNS jsou podobné změnám u PRiMA KO jedinců. PRiMA KO myší se také od ostatních AChE deficitních myší liší svou reakcí na AChE inhibitory. Naše výsledky nasvědčují, že AChE v periferních tkáních je hlavním cílem inhibitorů AChE a že chybění AChE v periferii je hlavní příčinou fenotypických charakteristik AChE KO myší.
|
|
|
Exprese cholinergního genového místa u myšího modelu Alzheimerovy nemoci
Zimčík, Pavel
(český jazyk) V současné době nejběžnější senilní demence, Alzheimerova choroba (AD), je charakterizována postižením paměti a vyšších kognitivních funkcí. Typickými post-mortem nálezy na mozcích pacientů s AD jsou extracelulární amyloidní plaky, intracelulární neurofibrilární klubíčka a poškozené cholinergní i ostatní neurotransmiterové systémy. Do dnes není známo spojení mezi poškozeným centrálním cholinergním systémem a hromaděním beta-amyloidu. Naše experimenty se zaměřily na parietální kůru sedmiměsíčních APPswe/PS1dE9 transgenních myší, v jejichž mozcích dochází k vysoké produkci amyloidních fragmentů. Cholinerní synapse těchto myší vykazují funkční presynaptické (stimulované uvolňování acetylcholinu) i postsynaptické (aktivace G-proteinů muskarinovými receptory) poruchy a úbytek cholinergních markerů. Pomocí qPCR jsme stanovili hodnoty exprese mRNA pro cholinacetyltransferázu, váčkový přenašeč pro acetylcholin a M1-M4 podtypy muskarinových receptorů u transgenních a kontrolních myší ze stejného vrhu. Získané hodnoty exprimované mRNA se u žádného genu signifikantně nelišily. Tyto výsledky ukazují, že úbytek cholinergních proteinů je důsledkem dějů na posttranskripční úrovni.
|
|
|
Cholinergic signaling in the striatum and its significance in cognitive flexibility
Smolík, Matyáš ; Janíčková, Helena (vedoucí práce) ; Funda, Jiří (oponent)
Cholinergní interneurony ve striatu se podílejí na řízení chování, motoriky a kognitivních funkcí. V poslední době celá řada publikací poukázala na jejich zvláštní význam pro kognitivní flexibilitu, tedy schopnost naučit se novým strategiím chování a přizpůsobovat se měnícím se podmínkám prostředí. Spolu s pracovní pamětí, kognitivní inhibicí, pozorností a jinými funkcemi patří kognitivní flexibilita mezi exekutivní funkce. Protože narušená kognitivní flexibilita je jedním ze symptomů celé řady neuropsychiatrických onemocnění, má studium jejích mechanismů prvořadý význam. Tato práce nejprve pojednává o anatomii striata, zastoupení jednotlivých typů neuronů ve striatu a o jeho funkcích. Poté se zaměří na popis cholinergního systému a na specifika cholinergní signalizace ve striatu. Třetí obecná část práce pojednává o kognitivní flexibilitě. Nakonec práce po obecném úvodu přinese podrobný přehled dostupných studií, které nám zatím částečně umožnily pochopit význam cholinergní signalizace ve striatu pro schopnost mozku potlačovat staré koncepty a nahrazovat je novými.
|
|
|
Targeting cholinergic system in tretment of Alzheimer's disease.
Golianová, Nikoleta ; Jakubík, Jan (vedoucí práce) ; Říčný, Jan (oponent)
Alzheimerova choroba je neurodegeneratívne ochorenie centrálnej nervovej sústavy a veľmi vážny typ demencie. Alzheimera malo 46,8 milióna ľudí na svete v roku 2015, a podľa Medzinárodnej organiácie Alzheimerovej choroby (ADI), sa bude počet pacientov zdvojnásobovať každých 20 rokov a v roku 2050 bude Alzheimerom postihnutých viac než 130 miliónov ľudí. Existujú dva typy: familiárny a sporadický. Familiárny typ má nástup v rannom veku a príčinou sú genetické faktory. Sporadický typ je častejší s neskorším nástupom a hlavnými faktormi sú vek a ε alela apolipoproteínu E. Hlavné príznaky sú poruchy pamäti, po ktorých nasleduje dezorientácia, zmätok, depresia a neskôr i vážne psychické a motorické poruchy. Tieto symptómy sú dôsledok straty neurónov spôsobenej tvorbou β-amyloidných olligomérov a neurofibrilárnych klbiek v centrálnej nervovej sústave (CNS). Zatiaľ neexistujú žiadne efektívne diagnostické metódy, ani terapeutické postupy, ktoré by zastavili degeneráciu mozgu. Existujú lieky, ako napríklad inhibítory acetylcholínesterázy, ktoré boli dokázané, že spomaľujú priebeh Alzheimerovej choroby. Ďalšie cholínergné lieky sú vyvíjané, ale ukázalo sa, že spôsobujú mnoho vedľajších efektov, pretože stimulujú viac typov receptorov. Nasledujúce farmakologické postupy sa zameriavajú na odstránenie plakov a...
|
|
|
Cholinergic system as pharmacological target in Alzheimer's disease
Golianová, Nikoleta ; Jakubík, Jan (vedoucí práce) ; Telenský, Petr (oponent)
Alzheimerova choroba je neurodegeneratíve ochorenie a veľmi vážny typ demencie. Alzheimer postihuje množstvo starších ľudí a tieto čísla rok čo rok narastajú. Existujú dva typy: familiárny a sporadický. Familiárny forma má nástup v rannom veku a príčinou sú genetické faktory. Sporadická forma je častejšia, s neskorším nástupom a hlavnými faktormi sú vek a ε alela apolipoproteínu E. Prvý symptóm je porucha pamäti, ktorý nasleduje zmätok, dezorientácia, depresia a neskôr vážne psychické a motorické poruchy. Tieto symptómy sú ako dôsledok straty neurónov, senilných plakov a neurofibrilárnych klbiek v centrálnej nervovej sústave (CNS). Zatiaľ neexistujú efektívne diagnostické alebo terapeutické postupy, ktoré by zastavili degeneráciu mozgu. Inhibítory acetylcholínesterázy sú momentálne jediné schválené liečivá, ktoré boli dokázané, že spomaľujú priebeh Alzheimerovej choroby. Ďalšie cholínergné lieky boli vyvíjané, ale ukázalo sa, že spôsobujú mnoho vedľajších efektov. Výskumy sa snažia nájsť taký modulátor, ktorý by sa zameriaval na špecifické receptory v CNS, aby sa takým vedľajším efektom zabránilo. Kľúčové slová: acetylcholín, Azlheimerova choroba, β-amyloid, cholínergný systém, farmakológia, inhibítor cholínesterázy, muskarínové receptrory, nikotínové receptory
|
|
|
Působení vybraných analogů odvozených od látky 7-MEOTA na některé aspekty cholinergního systému
Sedláček, Lukáš ; Říčný, Jan (vedoucí práce) ; Hejnová, Lucie (oponent)
Tato práce se zabývá stanovením enzymatické aktivity několika vybraných analogů 7-methoxytakrinu (7-MEOTA). Ten je derivátem takrinu, který se používal k symptomatické léčbě Alzheimerovy choroby (AD), dokud nebyl nahrazen jinými léky s lepším terapeutickým indexem. 7-MEOTA stejně jako tarkin terapeuticky působí tím, že inhibuje acetylcholinesterázu (AChE) a zvyšuje tak množství neurotransmiteru acetylcholinu v organismu. Vykazuje podobnou sílu a typ inhibice, ale na rozdíl od takrinu je méně toxický. Některé dříve zkoumané analogy 7-MEOTA byly stejně silnými, nebo dokonce ještě silnějšími inhibitory AChE, a tedy i slibnými budoucími léčivy. Navzdory tomu ale látky analyzované v této práci vykazovaly všechny slabší inhibici enzymatické reakce i menší afinitu k AChE. U každé ze zkoumaných sloučenin byly vypočteny ukazatele IC50, Ki a Ki' a stanoven typ inhibice, kterým na AChE působí. Typ inhibice byl u všech analogů 7-MEOTA smíšený. Ve své teoretické části se práce zabývá projevy a důvodem vzniku AD, genetickými faktory apod., přičemž se snaží využívat i některých poznatků a teorií z antropologického diskursu.
|
|
|
Stanovení acetylcholinu pomocí LC-MS ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů LC-MS/MS
Vrobel, Ivo ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Ivo Vrobel Školitelé: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc; Katedra analytické chemie, Farmaceutická fakulta, Univerzita Karlova v Praze Prof. Seppo Auriola, MSc.(Chem.) Marko Lehtonen; Katedra farmaceutické chemie, Škola farmacie, Univerzita Východního Finska v Kuopiu Název diplomové práce: Stanovení acetylcholinu pomocí LC-MS/MS ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů Byla vyvinuta nová rychlá a jednoduchá analytická metoda na stanovení acetylcholinu (ACh) ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů založena na kapalinové chromatografii spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS), využívající isotopicky značený vnitřní standard. Pentafluorofenylpropylová (PFPP) stacionární fáze spolu s mobilní fází složené z 0.05% vodného roztoku TFA a 4% ACN zabezpečuje dostatečnou retenci ACh a jeho separaci od anorganických solí. Ionizace ACh a vnitřního standardu, odolná vůči použití TFA, byla dosažena pomocí ionizace termosprejem za atmosférického tlaku (APTSI). Detekce ACh a vnitřního standardu byla docílena pomocí selektivního reakčního monitoringu (SRM) v lineární iontové pasti. Křížová validace byla provedena porovnáním nově vyvinuté metody s validovanou metodou rutinně používanou ke stanovení ACh. Soubor...
|
|
|
Adaptace centrálního nervového systému na chybění acetylcholinesterázy
Farár, Vladimír ; Mysliveček, Jaromír (vedoucí práce) ; Jakubík, Jan (oponent) ; Cordero-Erausquin, Matilde (oponent)
Acetylcholinesteráza (AChE) účinně hydrolyzuje acetylcholin (Ach). Inhibice AChE je letální a myši s chyběním AChE ve všech tkáních (AChE KO) jsou těžce poškozeny. AChE je v CNS kotvena na prolin bohatou kotvou - proline-rich membrane anchor (PRiMA), zatímco ve svalech je kotvena kolagenem Q (ColQ). V této disertaci popisujeme že u PRiMA KO myší, u nichž je AChE v CNS eliminována, nedochází k významným změnám v chování i přes nadbytek ACh a adaptaci cholinergních receptorů podobnou té, která byla pozorována u AChE KO myší. Kromě toho u myší, u nichž AChE nemůže interagovat s PRiMA i ColQ, je fenotyp podobný jako u AChE KO myší, ale biochemické změny v CNS jsou podobné změnám u PRiMA KO jedinců. PRiMA KO myší se také od ostatních AChE deficitních myší liší svou reakcí na AChE inhibitory. Naše výsledky nasvědčují, že AChE v periferních tkáních je hlavním cílem inhibitorů AChE a že chybění AChE v periferii je hlavní příčinou fenotypických charakteristik AChE KO myší.
|
|
|
Působení vybraných analogů odvozených od látky 7-MEOTA na některé aspekty cholinergního systému
Sedláček, Lukáš ; Říčný, Jan (vedoucí práce) ; Hejnová, Lucie (oponent)
Tato práce se zabývá stanovením enzymatické aktivity několika vybraných analogů 7 methoxytakrinu (7-MEOTA). Ten je derivátem takrinu, který se používal k symptomatické léčbě Alzheimerovy choroby (AD), dokud nebyl nahrazen jinými léky s lepším terapeutickým indexem. 7-MEOTA stejně jako tarkin terapeuticky působí tím, že inhibuje acetylcholinesterázu (AChE) a zvyšuje tak množství neurotransmiteru acetylcholinu v organismu. Vykazuje podobnou sílu a typ inhibice, ale narozdíl od takrinu je méně toxický. Některé dříve zkoumané analogy 7-MEOTA byly stejně silnými, nebo dokonce ještě silnějšími inhibitory AChE a tedy i slibnými budoucími léčivy. Navzdory tomu ale látky analyzované v této práci vykazovaly všechny slabší inhibici enzymatické reakce i menší afinitu k AChE. U každé ze zkoumaných sloučenin byly vypočteny ukazatele IC50, Ki a Ki' a stanoven typ inhibice, kterým na AChE působí. Typ inhibice byl u všech analogů 7 MEOTA smíšený. Ve své teoretické části se práce zabývá projevy a důvodem vzniku AD, genetickými faktory apod., přičemž se snaží využívat i některých poznatků a teorií z antropologického diskurzu. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
host ::
RSS.